2019-95
細(xì)胞爬片制備詳細(xì)過(guò)程【爬片的準(zhǔn)備】1.爬片可用一般的蓋玻片,也可用爬片;2.應(yīng)用蓋玻片,可根據(jù)自己的需要剪裁成合適的大小,以備置于6孔板、12孔板或24孔板;裁剪時(shí)可用前護(hù)士輸液用于打開(kāi)玻璃安瓶的小沙輪,或者是口腔科的那種小沙輪,輕輕劃一下后,稍用力一掰就分開(kāi)了。如果接種大皿的話,我一般不將蓋玻片切開(kāi),直接清潔后放入培養(yǎng)皿中,到染色時(shí)再將之切開(kāi),這樣既保證了細(xì)胞均一性,又可同時(shí)做幾個(gè)指標(biāo)的染色。3.將剪裁好的爬片,置于濃硫酸中浸泡并過(guò)夜,第二天先用自來(lái)水沖洗20遍,再置于無(wú)水...
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2019-94
抗熒光衰減封片劑(含DAPI)和不含DAPI的區(qū)別抗熒光衰減封片劑是一種用于減緩熒光衰減的封片試劑。以甘油為基礎(chǔ),加入抗熒光衰減劑,有強(qiáng)烈的抗熒光衰減作用,用于對(duì)熒光組織和細(xì)胞樣品的封片。封片后,樣品4℃或者-20℃避光可保存2-3周。在封片時(shí)用移液槍滴一滴抗熒光衰減封片液,蓋上蓋玻片就可以了。封片劑含細(xì)胞核DNA熒光染料DAPI,使實(shí)驗(yàn)操作更簡(jiǎn)便;封片劑干燥后會(huì)形成一層牢固的涂層,光學(xué)透明,非常便于后續(xù)觀察、拍照與儲(chǔ)存。DAPI即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-d...
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2019-93
胎牛血清使用中的常見(jiàn)問(wèn)題1、如何儲(chǔ)存和解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存在2-8℃時(shí),血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見(jiàn)的混濁。因此,推薦在-20℃以下儲(chǔ)存血清,并避免反復(fù)凍融。我們建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時(shí),請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。若一次無(wú)法用完一瓶,建議無(wú)菌分裝血清恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷...
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2019-92
提取DNA的方法總結(jié)與比較DNA提取是一項(xiàng)經(jīng)常要做的實(shí)驗(yàn),下面我們就總結(jié)了四種dna提取方法并做詳細(xì)說(shuō)明和比較。一.濃鹽法提取DNA:A.利用RNA和DNA在電解溶液中溶解度不同,將二者分離,常用的方法是用1M氯納提取化鈉抽提,得到的DNP粘液與含有少量辛醇的三氯甲烷一起搖蕩,使乳化,再離心除去蛋白質(zhì),此時(shí)蛋白質(zhì)凝膠停留在水相及三氯甲烷相中間,而DNA位于上層水相中,用2倍體積95%乙醇可將DNA鈉鹽沉淀出來(lái).B.也可用0.15MNaCL液反復(fù)洗滌細(xì)胞破碎液除去RNP,再以1...
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2019-830
幾種核酸染料的比較1、EB(溴化乙錠)溴化乙錠是一種高度靈敏的嵌入性熒光染色劑,為強(qiáng)致癌誘變劑,但價(jià)格便宜。它與DNA的結(jié)合幾乎沒(méi)有堿基序列特異性。在高離子強(qiáng)度的飽和溶液中,大約每2.5個(gè)堿基插入一個(gè)溴化乙錠分子。EB的這種特性使其成為一種核酸染料,常用于瓊脂糖凝膠電泳中的核酸染色。溴化乙錠在紫外區(qū)302nm和366nm處有吸收峰,在紫外光的照射下,溴化乙錠可被激發(fā)出橙紅色的熒光(590nm)。結(jié)合有DNA的溴化乙錠復(fù)合物的熒光強(qiáng)度要比沒(méi)有結(jié)合DNA的染料高出20-30倍,因...
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2019-829
一、單細(xì)胞核提取的方法1.Ficoll分層液法Ficoll分層液法是一種單次密度梯度離心分離法.聚蔗糖-泛影葡胺是一種較理想的細(xì)胞分層液,其主要成分是一種合成的蔗糖聚合物稱聚蔗糖(商品名為Ficoll),分子量為40kD,具有高密度、低滲透壓、無(wú)毒性的特點(diǎn).高濃度的Ficoll溶液粘性高,易使細(xì)胞聚集,故通常使用60g/L的低濃度溶液,密度為1.020,添加比重為1.200的泛影葡胺(urografin)以增加密度.國(guó)外常用商品Isopaque或Hypaque,故又稱Fico...
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2019-828
細(xì)胞凋亡是指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定,由基因控制的細(xì)胞自主的有序的死亡。細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死不同,細(xì)胞凋亡不是一件被動(dòng)的過(guò)程,而是主動(dòng)過(guò)程,它涉及一系列基因的激活、表達(dá)以及調(diào)控等的作用;它并不是病理?xiàng)l件下,自體損傷的一種現(xiàn)象,而是為更好地適應(yīng)生存環(huán)境而主動(dòng)爭(zhēng)取的一種死亡過(guò)程。細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí),就像樹(shù)葉或花的自然凋落一樣,對(duì)于這種生物學(xué)觀察,借臘“Apoptosis”來(lái)表示,意思是像樹(shù)葉或花的自然凋落,可譯為細(xì)胞凋亡。其實(shí)從嚴(yán)格的詞學(xué)意義上來(lái)說(shuō),細(xì)胞程序性死亡與細(xì)胞凋亡是有很大區(qū)別的。細(xì)胞...
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2019-827
DH5α感受態(tài)細(xì)胞品牌:Solarbio|貨號(hào):C1100本公司生產(chǎn)的DH5α感受態(tài)細(xì)胞是采用大腸桿菌DH5α菌株經(jīng)特殊工藝制備得到,可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pUC19質(zhì)粒檢測(cè),轉(zhuǎn)化效率可達(dá)108,-70℃保存3-5個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變?;蛐?supE44△lacU169(φ80lacZ△M15)hsdR17recA1endA1gyrA96thi-1relA1特點(diǎn):一種用于鋪制與培養(yǎng)質(zhì)粒平板和粘粒平板的重組缺陷的抑制型菌株。其φ80lacZ△M15基因的產(chǎn)物可與pUC...
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