核蛋白提取試劑盒

品牌：Solarbio | 貨號：R0050

產(chǎn)品簡介： 本核蛋白提取試劑盒提供了一種簡單、方便的從培養(yǎng)細(xì)胞或新鮮組織中抽提核蛋白的方法。整個(gè)過程只需約60分鐘就可以將核蛋白和漿蛋白從細(xì)胞中分離出來。得到的蛋白可以用于Western blot等實(shí)驗(yàn)。本試劑盒通過漿蛋白抽提試劑使細(xì)胞膨脹破裂，釋放出胞漿蛋白，再通過離心得到細(xì)胞核。然后通過核蛋白抽提試劑抽提得到細(xì)胞核蛋白。本試劑盒可以抽提50/100個(gè)樣品（每個(gè)樣品約2×106個(gè)Hela細(xì)胞或40mg組織）。

規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品內(nèi)容：

保存：核/漿蛋白抽提試劑4℃保存，PMSF于-20 ℃保存。

操作方法：

裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。

一、對于體外培養(yǎng)細(xì)胞：

1．根據(jù)用量取適當(dāng)?shù)臐{蛋白抽提試劑和核蛋白抽提試劑加入PMSF，使PMSF的終濃度為1mM。PMSF需現(xiàn)用現(xiàn)加，若目標(biāo)蛋白含有豐富的半胱氨酸，可以在兩種蛋白抽提液中加入DTT終濃度0.5mM。

2．對于貼壁細(xì)胞，去除培養(yǎng)液，用PBS洗一遍，用細(xì)胞刮刀收集細(xì)胞，或用EDTA消化后吹打下細(xì)胞（一般不用胰酶硝化，以免胰酶消化目的蛋白）。500 g離心2～3分鐘收集細(xì)胞，吸盡上清留下沉淀備用。

3．對于懸浮細(xì)胞：用PBS洗一遍，500 g離心2～3分鐘收集細(xì)胞，吸盡上清，留下細(xì)胞沉淀備用。

4．每20μl細(xì)胞沉淀加入200μl漿蛋白抽提試劑（2×106個(gè)細(xì)胞沉淀的體積約20μl或40mg）。

5．用移液器吹打或高速渦旋15秒（可適當(dāng)延長），必須使細(xì)胞沉淀*分散開成單細(xì)胞懸液。細(xì)胞沉淀分散不*會導(dǎo)致蛋白產(chǎn)量降低。

6．冰浴10分鐘。

7．大轉(zhuǎn)速劇烈渦旋10秒，4℃ 12000～16000g離心10分鐘。

8．上清即為抽提得到的細(xì)胞漿蛋白，立即吸取上清預(yù)冷的樣品管中備用，進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western等實(shí)驗(yàn)，但蛋白濃度較低，可根據(jù)需要進(jìn)行相應(yīng)濃縮。

9．沉淀即為細(xì)胞核，要*吸盡殘余的上清（避免細(xì)胞漿蛋白的污染），加入50-100μl核蛋白抽提試劑。

10．用移液器吹打或高速渦旋15秒（可適當(dāng)延長）沉淀*分散，之后冰浴10分鐘。

11．大轉(zhuǎn)速劇烈渦旋10秒，4℃12000～16000g離心10分鐘。

12．立即吸取上清預(yù)冷的樣品管中，此即為抽提得到的細(xì)胞核蛋白?？蛇M(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)或-70℃凍存。    

對于組織樣品：    把組織稱重后，盡可能切成非常細(xì)小的碎片，按每50mg組織加入200μl-500μl PBS，用勻漿器冰上勻漿制成細(xì)胞懸液，500 g離心2～3分鐘收集細(xì)胞，吸盡上清，收集沉淀。加入200μl漿蛋白抽提試劑后接上述步驟5。

注意事項(xiàng)：

1．裂解得到的蛋白樣品，由于含有較高濃度的去垢劑干擾，不能用Bradford法測定蛋白濃度，可以選用本公司生產(chǎn)的BCA蛋白定量試劑盒(貨號PC0020)測定蛋白濃度。

2．對于組織樣品，本試劑盒適用于新鮮組織，對凍存組織抽提效果較差。

3．為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

相關(guān)產(chǎn)品： 

P1020          1×PBS，PH7.2-7.4，0.01M 

P1016          4×蛋白上樣緩沖液（含巰基還原劑） 

S1010          10% SDS PR1400 低分子量蛋白 MARKER 

PC0020          BCA 法蛋白濃度測定試劑盒 

PC0030          Lowry 法蛋白濃度測定試劑盒