轉(zhuǎn)印緩沖液提供了電極之間的電連續(xù)性，其必須是導(dǎo)電的。它還提供了一個化學(xué)環(huán)境，能維持蛋白質(zhì)的溶解度，又不妨礙轉(zhuǎn)移過程中蛋白質(zhì)吸附到膜上。

傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)印緩沖液包含緩沖系統(tǒng)和甲醇。Tris甘氨酸緩沖液，常用于槽轉(zhuǎn)印系統(tǒng)中。這種緩沖液的pH值為8.3，比大多數(shù)蛋白的等電點(diǎn)（pI）要高。在凝膠上分離的蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷，向陽極遷移。由于槽內(nèi)的緩沖液是混合的，故轉(zhuǎn)移過程中的離子分布保持相對恒定。

在蛋白測序應(yīng)用中，建議使用10 mM CAPS緩沖液（pH=11）。凝膠電泳緩沖液中殘留的甘氨酸導(dǎo)致蛋白測序過程中出現(xiàn)高背景。通過改變轉(zhuǎn)印緩沖液的配方，這種假象明顯減少。

CAPS轉(zhuǎn)移緩沖液適用于Western Blot實(shí)驗(yàn)中把蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜或硝酸纖維素(NC)膜上，以便進(jìn)行抗體的孵育和下游實(shí)驗(yàn)。 CAPS轉(zhuǎn)移緩沖液(高分子量)主要由CAPS、DTT、甲醇等組成，緩沖范圍pH9.7-11.1。適用于大分子量蛋白質(zhì)(＞61KD)轉(zhuǎn)移到PVDF膜或硝酸纖維素膜，效果優(yōu)于普通的Western轉(zhuǎn)移緩沖液，直接使用

轉(zhuǎn)印緩沖液甲醇的功能

添加到轉(zhuǎn)印緩沖液中的甲醇有兩個主要功能：

• 穩(wěn)定凝膠的尺寸。
• 從蛋白質(zhì)分子上解離出復(fù)合的SDS。

聚丙烯酰胺是一種水凝膠，具有吸收水分的能力。在純水中，各個維度的凝膠尺寸都有相當(dāng)量的增加。溶脹度也取決于凝膠中所使用的丙烯酰胺的濃度。高濃度的凝膠比低濃度的凝膠溶脹得更多。梯度膠會明顯突出這種影響，其底部高濃度的區(qū)域比頂部溶脹得更多。開始時是矩形的凝膠可能會變成梯形。添加到轉(zhuǎn)印緩沖液中的甲醇能大限度地減少凝膠溶脹，當(dāng)甲醇濃度為10%-20%時，尺寸穩(wěn)定性可相當(dāng)快速地實(shí)現(xiàn)。當(dāng)甲醇濃度較低時，平衡需要更長的時間才能實(shí)現(xiàn)。如果在轉(zhuǎn)移過程中發(fā)生尺寸改變，蛋白質(zhì)的分辨可能會損失。

甲醇可幫助從蛋白質(zhì)分子上解離所復(fù)合的SDS。盡管SDS對凝膠上單個蛋白質(zhì)的分辨很必要，但是對于有效印跡卻是極為不利的。先，SDS的結(jié)合給蛋白質(zhì)分子帶來高的負(fù)電荷密度，導(dǎo)致蛋白質(zhì)分子非?？焖俚卮┻^膜，減少在孔結(jié)構(gòu)內(nèi)的停留，從而降低分子間相互作用的機(jī)會。其次，通過包被蛋白質(zhì)分子，SDS限制蛋白質(zhì)與PVDF進(jìn)行分子接觸的能力。這些影響隨著蛋白質(zhì)的分子量降低而增加。甲醇通過解離SDS，并提高蛋白質(zhì)分子與膜結(jié)合的可能性，從而減少這兩方面的影響。

轉(zhuǎn)膜洗滌液

TBS緩沖液是生物學(xué)中常使用的等滲緩沖鹽溶液，主要用于免疫組化和原位雜交，酶聯(lián)免疫等實(shí)驗(yàn)中，清洗免疫印跡實(shí)驗(yàn)中非特異性結(jié)合的抗體等。由 Tris-HCl 構(gòu)成穩(wěn)定的PH緩沖體系，NaCl 提供等滲條件。本產(chǎn)品為 20×濃縮液，稀釋后使用。組分濃度 Tris 200 mM NaCl 3 M PH 7.5-7.6使用時稀釋成 1×，可加入 0.05% Tween-20，用于免疫印跡膜清洗。為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

TBST 即在TBS中加入吐溫20，吐溫-20，濃度為0.5%-1.0%，增大濃度可以減小背景，同時更容易洗下結(jié)合不牢固的蛋白。