流式細(xì)胞儀和細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色
無紅細(xì)胞的單細(xì)胞懸浮液制備的脾細(xì)胞，刀豆蛋白A爆炸或PBL在FACS緩沖液（PBS中，用1％牛血清白蛋白和0.05％NaN的3）和細(xì)胞進(jìn)行染色，在黑暗中在冰上20分鐘，進(jìn)行表面的表達(dá)CD8α（ APC-CY7），CD4（PerCP CY5.5），CD3ε（FITC），CD137（FITC），CD19（PerCP-Cy5.5標(biāo)記），或NK1.1（PE-CY7所有的抗體，BD生物科學(xué)，圣地亞哥， CA）。細(xì)胞內(nèi)染色，細(xì)胞透性使用的Cytofix / Cytoperm試劑盒，根據(jù)生產(chǎn)商的方案，和細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子使用腫瘤壞死因子-α，腫瘤壞死因子-α或IFN-γ（PR-700，BD生物科學(xué)）。四聚體分析，進(jìn)行溫育的細(xì)胞懸浮液與H2-K b / TRP-2的180-188四聚體（SVYDFFVWL，APC-標(biāo)記，Sanquin，）或H2-K b / OVA 257-264四聚體，實物禮品CM 25分鐘，在37°C和5％CO 2之前，隨后的表面抗體染色。表面MHC-I類檢測是由孵化IFN-γ引物和未曝光B16.F10細(xì)胞與小鼠抗鼠MHC I類抗體，圣迭戈，隨后孵育檢測的山羊抗小鼠IgG2a抗體，測量樣品在FACS廣東II流式細(xì)胞儀（Beckton Dickinson公司，圣迭戈，CA）。使用FlowJo軟件的數(shù)據(jù)進(jìn)行了分析。