儲存條件
-20℃
中文名稱
α-半乳糖苷酶活性檢測試劑盒微量法
有效期
6個月
單位
盒
英文名稱
α-galactosidase(α-GAL) Activity Assay Kit
別名
α-半乳糖苷酶試劑盒 α-GAL Kit α-半乳糖苷酶（α-GAL）試劑盒 α-半乳糖苷酶（α-GAL）測試盒
檢測方法
微量法 Spectrophotometer/Microplate Reade

產(chǎn)品型號：BC2575-100T/48S

更新時間：2024-04-11

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問量：827

服務(wù)熱線

010-50973130

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產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-微量法

水溶性物質(zhì)羥自由基清除能力血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測盒微量法生化試劑盒

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產(chǎn)品介紹

α-半乳糖苷酶（α-GAL）活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號：BC2575
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
提取液	液體100 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	粉劑×2支	-20℃保存
試劑二	液體4 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑三	液體15 mL×1瓶	2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品	液體1 mL×1支	2-8℃保存

溶液的配制：
1、試劑一：臨用前取1支加入1.25 mL蒸餾水，充分溶解備用；用不完的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復(fù)凍融（1瓶粉劑溶解后可做100T，為了延長使用時間，此產(chǎn)品多給1瓶粉劑）；
2、標(biāo)準(zhǔn)品：5 μmol/mL的對硝基苯*溶液。
產(chǎn)品說明：
α-GAL (EC 3.2.1.22)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，能專一地催化α-半乳糖苷鍵的水解，主要參與棉子糖、水蘇糖、蜜二糖和半乳甘露聚糖等半乳糖苷的降解。α-GAL對于植物種子的萌發(fā)至關(guān)重要，種子萌發(fā)初期，其催化產(chǎn)生的D-半乳糖通過糖酵解途徑迅速轉(zhuǎn)化和消耗，為種子的萌發(fā)提供最初的能量來源，后期則主要參與細(xì)胞壁儲藏多糖水解。
α-GAL分解對-硝基苯-α-D-吡喃半乳糖苷生成對-硝基苯*，后者在400nm有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算α-GAL活性。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、超聲破碎儀、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞的處理：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次），15000g，4℃，離心20min，取上清，置冰上待測。
2、組織的處理：稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿；15000g，4℃，離心20min，取上清，置冰上待測。

測定步驟

分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至400nm，分光光度計蒸餾水調(diào)零。
標(biāo)準(zhǔn)液的稀釋：將標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋至200、100、50、25、12.5、6.25、0nmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液待測。
標(biāo)準(zhǔn)液稀釋可參考下表：

序號	稀釋前濃度（nmol/mL）	標(biāo)準(zhǔn)液體積（µL）	蒸餾水體積（µL）	稀釋后濃度（nmol/mL）
1	5000	80	1920	200
2	200	1000	1000	100
3	100	1000	1000	50
4	50	1000	1000	25
5	25	1000	1000	12.5
6	12.5	1000	1000	6.25
7	6.25	0	1000	0（空白管）

備注：實驗中每個標(biāo)準(zhǔn)管需70µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

樣本測定（在EP管或96孔板中依次加入下列試劑）：

試劑名稱（μL）	測定管	對照管	標(biāo)準(zhǔn)管
試劑一	25	-	-
蒸餾水	-	25	-
試劑二	35	35	-
樣本	10	10	-
迅速混勻，放入37℃水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱中準(zhǔn)確反應(yīng)30min
標(biāo)準(zhǔn)品	-	-	70
試劑三	130	130	130
充分混勻，室溫靜置2min后，于400nm處測定吸光值A，分別記為A測定管、A對照管、A標(biāo)準(zhǔn)管、A空白管。計算ΔA測定=A測定管-A對照管，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。每個測定管需設(shè)一個對照管。標(biāo)準(zhǔn)曲線和空白管只需測1-2次。