北京索萊寶科技有限公司
專注于生物學(xué)試劑及試劑盒領(lǐng)域
服務(wù)熱線：18101056239
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產(chǎn)品型號：BC2990-50T/24S
更新時間：2024-04-15
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
訪 問 量 ：903
010-50973130
產(chǎn)品分類
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注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC2990
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
試劑一 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 液體30mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑五 | 液體30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品 | 液體1mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑一：臨用前加入1mL蒸餾水充分溶解，2-8℃保存2周。臨用前根據(jù)用量用蒸餾水稀釋100倍，現(xiàn)用現(xiàn)配；
2、 試劑二：臨用前加15mL蒸餾水備用，2-8℃保存2周；
3、 試劑三：臨用前加15mL蒸餾水溶解，此溶液為飽和溶液，取上清使用即可。用不完的試劑2-8℃保存2周；
4、 標準品：10μmol/mL*標準液。
產(chǎn)品說明：
土壤亞硝酸還原酶（Solid-Nitrite reductase，S-NiR）是反硝化作用中的關(guān)鍵酶之一，它是由土壤反硝化細菌產(chǎn)生的一種還原酶類，可將NO2-還原為NO，它的活性反映了生物降解過程中氮素的轉(zhuǎn)化效率，為氮素轉(zhuǎn)化規(guī)律的研究提供一定的依據(jù)。
亞硝酸還原酶可將NO2-還原為NO，使樣本中參與重氮化反應(yīng)生成紫紅色化合物的NO2-減少，即540nm處吸光值的變化可反應(yīng)土壤中亞硝酸還原酶的活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、30-50目篩、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱烘干，過30-50目篩。
二、測定步驟
1、 分光光度計預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長至540nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 標準液的稀釋：將標準液用蒸餾水稀釋至0.8、0.6、0.4、0.2、0.1、0.05μmol/mL的標準液。
序號 | 稀釋前濃度（µmol/mL） | 標準液體積（µL） | 蒸餾水體積（µL） | 稀釋后濃度（µmol/mL） |
1 | 10 | 100 | 900 | 1 |
2 | 1 | 400 | 100 | 0.8 |
3 | 1 | 300 | 200 | 0.6 |
4 | 1 | 400 | 600 | 0.4 |
5 | 0.4 | 500 | 500 | 0.2 |
6 | 0.2 | 500 | 500 | 0.1 |
7 | 0.1 | 500 | 500 | 0.05 |
備注：實驗中每個標準管需400µL標準溶液。
3、 樣本測定：
試劑名稱 | 無基質(zhì)管 | 空白管1 | 對照管 | 測定管 | 標準管 | 空白管 |
風(fēng)干土樣（g） | - | - | 0.1 | 0.1 | - | - |
蒸餾水（μL） | - | 200 | 200 | - | - | - |
試劑一（μL） | 200 | - | - | 200 | - | - |
試劑二（μL） | 200 | 200 | 200 | 200 | - | - |
充分混勻后，25℃水浴準確反應(yīng)3h | ||||||
試劑三（μL） | 200 | 200 | 200 | 200 | - | - |
旋渦震蕩30s，10000rpm，4℃，離心10min | - | - | ||||
上清液（μL） | 400 | 400 | 400 | 400 | - | - |
標準品（μL） | - | - | - | - | 400 | - |
試劑四（μL） | 400 | 400 | 400 | 400 | 400 | 400 |
試劑五（μL） | 400 | 400 | 400 | 400 | 400 | 400 |
蒸餾水（μL） | 300 | 300 | 300 | 300 | 300 | 700 |
充分混勻，室溫放置15min后，測定540nm處各管吸光值，分別記為A無基質(zhì)管、A空白管1、A對照管、A測定管、A標準管和A空白管2，計算ΔA測定=（A無基質(zhì)管-A空白管1）-（A測定管-A對照管），ΔA標準=A標準管-A空白管2（標準曲線、無基質(zhì)管、空白管1、空白管2只需做1-2次）。 | ||||||
三、S-NiR計算
1. 標準曲線的繪制：
根據(jù)標準管的濃度（x，μmol/mL）和吸光度ΔA標準（y，ΔA標準），建立標準曲線。根據(jù)標準曲線，將ΔA測定（y，ΔA測定）帶入公式計算樣本濃度（x，μmol/mL）。
2. S-NiR的計算：
酶活單位定義：每g土樣每天還原1μmol NO2ˉ的量為一個酶活力單位。
S-NiR（U/g 土樣）=x×V反應(yīng)÷W÷T = 4.8×x÷W
T：反應(yīng)時間，3h=1/8d；V反應(yīng)：反應(yīng)體系體積，0.6mL；W：土樣質(zhì)量，g。
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