亞硝酸還原酶(NiR)活性檢測試劑盒常量法

產(chǎn)品簡介：

亞硝酸還原酶(NiR)活性檢測試劑盒常量法
有效期
6個月
儲存條件
2-8℃
單位
盒
英文名稱
Nitrite Reductase (NiR) Activity Assay Kit
檢測方法
可見分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/24S

產(chǎn)品型號：BC1540-50T/24S

更新時間：2024-07-09

廠商性質：生產(chǎn)廠家

訪問量：1446

服務熱線

010-50973130

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產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-常量法

谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）活性檢測總谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測 α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測硫代葡萄糖苷含量檢測生物堿含量檢測總氧化狀態(tài)（TOS）檢測 α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測水溶性物質羥自由基清除能力檢測植物銨態(tài)氮含量檢測試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測試劑盒細胞酸性磷酸酶細胞堿性磷酸酶果膠系列轉氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測定系列其它系列信號系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

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產(chǎn)品介紹

亞硝酸還原酶（NiR）活性檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。

貨號：BC1540

規(guī)格：50T/24S

產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
提取液	液體30mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	液體8mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	粉劑×2瓶	2-8℃保存
試劑三	粉劑×1瓶	2-8℃保存
試劑四	液體25mL×1瓶	2-8℃保存
試劑五	液體25mL×1瓶	2-8℃保存
標準品	液體1mL×1支	2-8℃保存

溶液的配制：

1、試劑二：臨用前加入6mL蒸餾水充分溶解，2-8℃保存2周；

2、試劑三：臨用前加入15mL蒸餾水，可70-80℃加熱溶解；2-8℃保存3個月。

3、試劑五：若出現(xiàn)沉淀，可70-80℃加熱溶解；

4、標準品：10µmol/mL亞硝 *標準溶液；

5、工作液：臨用前根據(jù)樣本量將試劑四和試劑五按1:1的比例混合，現(xiàn)用現(xiàn)配。

產(chǎn)品說明：

亞硝酸還原酶（Nitrite reductase，NiR）是亞硝態(tài)氮還原過程中的關鍵酶，在自然界氮素循環(huán)過程中發(fā)揮著重要作用，其廣泛存在于微生物及植物體內，能夠催化亞硝酸鹽還原，減少亞硝態(tài)氮在環(huán)境中的積累，降低其對生物體生長發(fā)育的毒害作用。

亞硝酸還原酶可將NO₂^-還原為NO，使樣本中參與重氮化反應生成紫紅色化合物的NO₂^-減少，即540nm處吸光值的變化可反應樣本中亞硝酸還原酶的活性。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、天平、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

1. 組織：按樣本質量（g）: 提取液體積（mL）1 : 5~10比例（建議稱取0.1g樣本，加入1.0mL提取液）加入提取液，冰浴勻漿后，于4 ℃，10000g，離心10min，棄沉淀，取上清液置于冰上待測。

2. 細菌或細胞：按細胞數(shù)量（10⁴）：提取液體積（mL）500~1000 : 1的比例（建議500萬細胞加入1.0mL提取液）加入提取液，冰浴超聲破碎細胞（功率200w，超聲3s，間隔7s，總時間3min），然后于4℃，10000g，離心10min，棄沉淀，取上清液置于冰上待測。

二、測定步驟

1、分光光度計預熱30min 以上，調節(jié)波長至540nm，蒸餾水調零。

2、標準液的稀釋：將10µmol/mL的標準溶液用蒸餾水稀釋至0.08、0.06、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0.0015625µmol/mL標準溶液待測。

3、標準液稀釋可參考下表：

序號	稀釋前濃度（µmol/mL）	標準液體積（µL）	蒸餾水體積（µL）	稀釋后濃度（µmol/mL）
1	10	30	270	1
2	1	80	920	0.08
3	1	60	940	0.06
4	1	50	950	0.05
5	0.05	500	500	0.025
6	0.025	500	500	0.0125
7	0.0125	500	500	0.00625
8	0.00625	500	500	0.003125
9	0.003125	500	500	0.0015625

備注：實驗中每個標準管需350µL標準溶液。

4、樣本測定：

試劑名稱（μL）	基質管	對照管	測定管	標準管	空白管
樣本	-	100	100	-	-
蒸餾水	100	200	-	-	-
試劑一	200	-	200	-	-
試劑二	200	200	200	-	-
	混勻后，25℃反應1h			-	-
試劑三	200	200	200	-	-
	充分震蕩30s，靜置5min，取上清			-	-
上清液	350	350	350	-	-
標準品	-	-	-	350	-
蒸餾水	-	-	-	-	350
工作液	700	700	700	700	700
充分混勻，靜置5min，于1mL玻璃比色皿中測定540nm各管吸光值，分別記為A基質管、A對照管、A測定管、A標準管和A空白管，計算ΔA測定=A基質管-（A測定管-A對照管），ΔA標準=A標準管-空白管。標準曲線、空白管和基質管只需測1-2次，每個測定管需設一個對照管。

三、亞硝酸還原酶活性計算

1. 標準曲線的繪制

以標準溶液濃度為x軸（x，μmol/mL），標準溶液對應的ΔA標準為y軸（y，ΔA標準），建立標準曲線，得到標準方程y=kx+b，將ΔA測定帶入方程得到x（μmol/mL）。

2. 酶活計算

（1）按照蛋白濃度計算

酶活單位定義：每mg組織蛋白每小時還原1μmol NO₂^ˉ的量為一個酶活力單位。

NiR（U/mg prot）=x×V1÷V2÷Cpr÷T=x×7÷Cpr

（2）按照樣本質量計算

酶活單位定義：每g組織每小時還原1μmol NO₂^ˉ的量為一個酶活力單位。

NiR（U/g 質量）=x×V1÷V2×V提÷W÷T=x×7÷W

（3）按照細菌/細胞數(shù)量計算

酶活單位定義：每10⁴個細菌/細胞每小時還原1μmol NO₂^ˉ的量為一個酶活力單位。

NiR（U/10⁴ 質量）=x×V1÷V2×V提÷細菌/細胞數(shù)量÷T=x×7÷細菌/細胞數(shù)量

V1：取上清液前的反應體系體積，0.7mL；V2：加入的樣本體積，0.1mL；V提：加入的提取液體積，1.0mL；T：反應時間，1h；W：土樣質量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；細菌/細胞數(shù)量：以10⁴計。

實驗實例：

1、取0.1g鳶尾葉片加入1mL提取液進行勻漿研磨，按照測定步驟操作，用微量玻璃比色皿測得計算ΔA測定= A基質管-（A測定管-A對照管）=0.678-（0.322-0.007）=0.363，帶入標準曲線y=8.633x+0.0038，計算x=0.0416，按樣本質量計算含量得，按樣本質量計算酶活得：