2015-121
單克隆技術(shù)又名雜交瘤技術(shù)。由G.K?hler和Milstein1975年創(chuàng)立。主要原理是利用產(chǎn)生抗體的B細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞雜交融合成雜交瘤細(xì)胞,生產(chǎn)抗體。單克隆抗體的制備過程主要有以下六個(gè)環(huán)節(jié),具體為抗原指標(biāo)、免疫動(dòng)物選擇、免疫程序的確定、免疫、細(xì)胞雜交與選擇培養(yǎng)。單抗制備步驟1、抗原制備制備單克隆抗體的免疫抗原,從純度上說雖不要求很高,但高純度的抗原使得到所需單抗的機(jī)會(huì)增加,同時(shí)可以減輕篩選的工作量。因此,免疫抗原是越純越好,應(yīng)根據(jù)所研究的抗原和實(shí)驗(yàn)室的條件來決定。2、免疫動(dòng)物...
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2015-121
一、HRP辣根過氧化酶是常見的酶促發(fā)光或顯色的交聯(lián)酶,由于HRP比活高、特異性更強(qiáng)、分子量?。?0kD)、穩(wěn)定性好和作用底物范圍廣的優(yōu)點(diǎn)而得到廣泛使用。HRP的底物種類有不少,主要可以分為化學(xué)發(fā)光底物和生色底物2大類:1.化學(xué)發(fā)光底物:化學(xué)發(fā)光底物主要考慮的是:發(fā)光信號強(qiáng)弱——發(fā)光信號當(dāng)然越強(qiáng)越好,強(qiáng)發(fā)光信號持續(xù)的時(shí)間也是越長越好,還有就是背景低靈敏度高。原理:試劑中的發(fā)光物在辣根過氧化物酶的作用下發(fā)生氧化降解,并發(fā)射波長為428nm的光,此光可經(jīng)x光膠片(放射自顯影片)感光...
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2015-121
物理性狀呈白色或淺黃色結(jié)晶體粉末狀,有刺激氣味,易溶于異丙醇,可溶于水,震蕩時(shí)產(chǎn)生大量泡沫。能與陰離子、非離子、兩性表面活性劑有良好的配位性。具有優(yōu)良的滲透、柔化、乳化、抗靜電、生物降解性及殺菌等性能。作用原理CTAB是一種陽離子去污劑,可溶解細(xì)胞膜,具有從低離子強(qiáng)度的溶液中沉淀核酸和酸性多聚糖的特性。它能與核酸形成復(fù)合物:在高鹽溶液中(0.7mol/LNaCl)是可溶的,當(dāng)降低溶液鹽濃度到一定程度(0.3mol/LNaCl)時(shí),從溶液中沉淀,通過離心就可將CTAB-核酸的復(fù)...
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2015-1112
二甲基亞砜物理性質(zhì)二甲基亞砜,英文名稱DMSO。無色粘稠液體。有吸濕性。能與水、乙醇、丙酮、乙醛、吡啶、乙酸乙酯、苯二甲酸二丁酯、二惡烷和芳烴化合物等任意互溶,不溶于乙炔以外的脂肪烴類化合物。二甲基亞砜用途廣泛,可用作溶液和反應(yīng)試劑。DMSO在有機(jī)合成,醫(yī)藥、電子等方面均有應(yīng)用。二甲基亞砜的合成二甲基亞砜一般采用二甲硫醚氧化法制得,由于所用的氧化劑和氧化方式不同,因而有不同的生產(chǎn)工藝。甲醇二硫化碳法甲醇和二硫化碳為原料,以γ-Al2O3作催化劑,先合成二甲基硫醚,再與二氧化氮...
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2015-1112
紅細(xì)胞裂解液裂解是一種比較溫和的紅細(xì)胞去除方法,它能既不損傷有核細(xì)胞又能充分的去除紅細(xì)胞。那么紅細(xì)胞裂解液的原理是怎么樣的呢?裂解液作用原理血紅細(xì)胞表面上有紅細(xì)胞專屬的表面抗原,當(dāng)裂解液中含可以攻擊特定紅細(xì)胞表面抗原的酶的時(shí)候就只會(huì)造成紅細(xì)胞的變形,生物通道擴(kuò)大膨脹裂解,或者引起紅細(xì)胞的變形,而不會(huì)攻擊其他細(xì)胞;另外紅細(xì)胞有自己的電負(fù)性,滲透脆性(通常是一些非酶細(xì)胞裂解液的突破點(diǎn)),懸浮穩(wěn)定性,這都是區(qū)別于其他種類細(xì)胞的區(qū)別點(diǎn)。紅細(xì)胞裂解液就是利用這些特性裂解紅細(xì)胞的。另外紅...
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2015-1112
蘇丹Ⅲ本身是一種有機(jī)物,所以易溶于脂肪,這個(gè)就是化學(xué)中的相似相溶原理。蘇丹Ⅲ在脂肪中的溶解度比在酒精中的溶解度大,當(dāng)用蘇丹Ⅲ的酒精溶液處理含有脂肪的生物組織時(shí),酒精中的蘇丹Ⅲ進(jìn)入脂肪中,將脂肪染成橘黃色。蘇丹Ⅲ適合用于生物脂肪材料的鑒定,可在光學(xué)顯微鏡下看到被染成橘黃色的小粒。蘇丹Ⅲ染色液染色步驟取材:取一粒浸泡過的花生種子,去掉種皮。切片:用刀片在花生子葉的橫斷面上平行切下若干薄片,放入盛有清水的培養(yǎng)皿中待用制片:從培養(yǎng)皿中選取薄的切片,用毛筆蘸取放在載玻片中央;在花生子葉...
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2015-1112
白酶K,是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶,從林伯氏白色念球菌中純化得到,它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵。由于蛋白酶K具有降解天然蛋白質(zhì)的能力,因此多用于生物樣品中蛋白質(zhì)的一般降解;其消化過程中通常加入EDTA以抑制依賴于mg2+的核酸酶的作用。蛋白酶K的一般工作濃度是50-100μg/ml。在較廣的pH范圍內(nèi)(pH4-12.5)均有活性。蛋白酶K可替代DEPC處理RNA抽提用的離心管和槍頭,實(shí)現(xiàn)滅活RNaseA的目的,也用于處理RNase-Free的水。充分降解組...
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2015-1022
氯化硝基四氮唑藍(lán)(NBT)又稱作硝基四氮唑藍(lán)。是一種黃色粉末,易吸濕,溶于水和乙醇,微溶于乙酸乙酯。其還原物(Diformazan)為黑紫色結(jié)晶性粉末,溶于多數(shù)有機(jī)溶劑。NBT的作用氯化硝基四氮唑藍(lán)(NBT)可以作為脫氫酶和其它過氧化酶的底物。用于測定葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(glucose-6-phosphatedehydrogenase);也是凝血因子I(fibrinogen)的沉淀試劑。氯化硝基四氮唑藍(lán)(NBT)是堿性磷酸酶底物之一,與BCIP一起,在堿性磷酸酶的催化下生...
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